A+醫(yī)學(xué)百科 >> 凝膠過濾法

凝膠過濾，英文Gel filtration

凝膠過濾法又稱分子排阻法， 這是一種高效分離純化蛋白質(zhì)的方法。原理是不同的蛋白質(zhì)分子對固定化在載體上的特殊配基具有不同的識別和結(jié)合能力。選擇與待純化蛋白質(zhì)具有特殊識別和結(jié)合作用的配基，然后應(yīng)用化學(xué)方法將該配基與載體共價鏈接。將這種有配基的載體裝入層析柱中，當(dāng)含有待純化的蛋白質(zhì)溶液通過層析柱時，該蛋白質(zhì)即與配基發(fā)生特異性結(jié)合而被吸附在層析柱上，而其他蛋白質(zhì)則流出柱外。被特異性結(jié)合在層析柱上的蛋白質(zhì)，可以用適當(dāng)?shù)?a href="/w/%E9%85%8D%E4%BD%93" title="配體">配體洗脫液洗脫。

缺點(diǎn)：從凝膠過濾的原理可知，蛋白質(zhì)分子通過凝膠柱的速度(即洗脫體積的大小)并不直接取決于分子的質(zhì)量，而是它的斯篤克半徑，利用凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)分子量時，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(已知分子量和斯篤克半徑)和待測蛋白質(zhì)必須具有相同的分子形狀(接近球體)，否則不能得到比較準(zhǔn)確的分子量。分子形狀為線形的或與凝膠能發(fā)生吸附作用的蛋白質(zhì)，則不能用此方法測定分子量。而且柱子成本比較高，整個實(shí)驗(yàn)過程耗時很長。

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