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芽胞

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芽胞(spore)

在一定條件下,芽胞桿菌屬(如炭疽桿菌)及梭狀芽胞桿菌屬(如破傷風(fēng)桿菌、氣性壞疽病原菌)能在菌體內(nèi)形成一個折光性很強(qiáng)的不易著色小體,稱為內(nèi)芽胞(endospore),簡稱芽胞。芽胞一般只在動物體外才能形成,并受環(huán)境影響,當(dāng)營養(yǎng)缺乏,特別是碳源、氮源或磷酸鹽缺乏時,容易形成芽

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胞。不同細(xì)菌開成芽胞還需不同的條件,如炭疽桿菌須在有氧條件下才能形成芽胞。成熟的芽胞可被許多正常代謝物丙氨酸、腺苷、葡萄糖、乳酸等激活而發(fā)芽,先是芽胞酶活化皮質(zhì)層及外殼迅速解聚,水分進(jìn)入,在合適的營養(yǎng)和溫度條件下,芽胞的核心向外生長成繁殖體,開始發(fā)育和分裂繁殖。芽胞并非細(xì)菌的繁殖體,而是處于代謝相對靜止的休眠休態(tài),以維持細(xì)菌生存的持久體。

芽胞含水量少(約40%),蛋白質(zhì)受熱不易變性。芽胞具有多層厚而致密的胞膜,由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、芽胞壁、皮質(zhì)、外膜、芽胞殼和芽胞外衣(圖2-10)。特別是芽胞殼,無通透性,有保護(hù)作用,能阻止化學(xué)品滲入。芽胞形成時能合成一些特殊的酶,這些酶較之繁殖體中的酶具有更強(qiáng)的耐熱性。芽胞核心和皮質(zhì)層中含有大量吡啶二羧酸(dipicolinic acid,dpa),占芽胞干重的5~15%,是芽胞所特有的成分,在細(xì)菌繁殖體和其他生物細(xì)胞中都沒有。dpa能以一種現(xiàn)尚不明的方式,使芽胞的酶類具有很高的穩(wěn)定性。芽胞形成過程中很快合成dpa,同時也獲得耐熱性。芽胞呈圓形或橢圓形,其直徑和在菌體內(nèi)的位置隨菌種而不同,例如,炭疽桿菌的芽胞為卵圓形、比菌體小,位于菌體中央;破傷風(fēng)桿菌芽胞正圓形、比菌體大,位于頂端,如鼓槌狀。這種形態(tài)特點(diǎn)有助于細(xì)菌鑒別(圖2-11)。芽胞在自然界分布廣泛,因此要嚴(yán)防芽胞污染傷口、用具、敷料、手術(shù)器械等。芽胞的抵抗力強(qiáng),對熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等理化因素均有強(qiáng)大的抵抗力,用一般的方法不易將其殺死。有的芽胞可耐100℃沸水煮沸數(shù)小時。殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。當(dāng)進(jìn)行消毒滅菌時往往以芽胞是否被殺死作為判斷滅菌效果的指標(biāo)。

芽胞:某些細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下,能在菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體,是細(xì)菌的休眠方式,稱為內(nèi)芽胞(endospore),簡稱芽胞(spore)。產(chǎn)生芽胞的細(xì)菌都是革蘭陽性菌。

繁殖體:與芽胞相比,未形成芽胞而具有繁殖能力的菌體稱為繁殖體。

芽胞的形成與發(fā)芽

芽胞形成條件:一般只在動物體外才能形成,其形成條件引菌種而異。有的要在需氧條件下形成(如炭疽芽胞桿菌),有的則相反(如破傷風(fēng)桿菌);多數(shù)芽胞形成是在營養(yǎng)缺乏時,但也有例外(如蘇云金桿菌)。

芽胞生物學(xué)特性

折光性強(qiáng),不易著色。大小、形狀、位置因菌種而易,有重要的鑒別價值。(圖1-3)

芽胞的結(jié)構(gòu)

成熟的芽胞由多層膜結(jié)構(gòu)組成,帶有完整的核質(zhì)、酶系統(tǒng)和合成菌體組分的結(jié)構(gòu),保存有細(xì)菌的全部生命必須物質(zhì)。

發(fā)芽:在芽胞形成后,可由于某些因素的刺激作用(如機(jī)械力、熱等),破壞其芽胞殼,并供給水分和營養(yǎng),芽胞即可發(fā)芽,形成新的菌體。在細(xì)菌形成芽胞再發(fā)芽的過程中,細(xì)菌數(shù)量并未增加,故芽胞不是細(xì)菌的繁殖方式。(圖)

功能:

增加了細(xì)菌對外界不良環(huán)境的抵抗力。芽胞賦予細(xì)菌對多種理化因素(如熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等)強(qiáng)大的抵抗力,使細(xì)菌在惡劣的環(huán)境中得以長期保持活性。雖然芽胞不能直接引起疾病,但其強(qiáng)大的抵抗力可使病原菌有機(jī)會存活下來并在適當(dāng)條件下致病。

芽胞抵抗力強(qiáng)大的原因有三:

1.芽胞含水量少,蛋白質(zhì)受熱后不易變性;

2.芽胞具有多層致密的厚膜,理化因素不易透入;

3.芽胞中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸(DPA),DPA與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽胞中各種酶的熱穩(wěn)定性。

判斷滅菌效果的指標(biāo):因芽胞的抵抗力遠(yuǎn)較繁殖體強(qiáng),故而當(dāng)進(jìn)行消毒滅菌時可將芽胞是否被殺死作為判斷滅菌是否徹底的指標(biāo)。

應(yīng)用

①滅菌的指標(biāo)

②細(xì)菌鑒別

由于芽胞的各種特殊構(gòu)造,在一般程度上,芽胞代表著生物學(xué)上滅菌難度的最高點(diǎn),因此常以滅芽胞的指標(biāo)作為微生物滅菌的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室一般采用高壓蒸汽滅菌,分為兩種方式:120℃,保持20min;115℃,保持20min.。前者作為一般培養(yǎng)基的滅菌方式,后者為含糖培養(yǎng)基的滅菌。

鑒別芽胞的方式有專門額染色方式:芽胞染色法。

方法是:

)制備苗液:加1-2滴無菌水于小試管中,用接種環(huán)從斜面上挑取2-3環(huán)的菌體于試管中并充分打勻,制成濃稠的菌液。2)加染色液:加5%孔雀綠水溶液2-3滴于小試管中,用接種環(huán)攪拌使染料與菌液充分混合。 3)加熱:將此試管浸于沸水浴(燒杯),加熱15-20min。 4)涂片:用接種環(huán)從試管底部挑數(shù)環(huán)菌液于潔凈的載玻片上,做成涂面晾干。 5)固定:將涂片通過酒精燈火焰3次。 6)脫色:用水洗直至流山的水中無孔雀綠顏色為止。 7)復(fù)染:加番紅水溶液染色5min后,傾去染色液,不用水洗直接用吸水紙吸干。8)鏡檢:先低倍,再高倍,最后用油鏡觀察。結(jié)果:芽胞呈綠色,芽胞囊和菌體為紅色。(2)Schaeffer與Fulton氏染色法1)涂片:按常規(guī)方法將待檢細(xì)菌制成一薄的涂片。2)晾干固定:待涂片晾干后在酒精燈火焰上通過2-3 次3)染色: ①加染色液:加5%孔雀綠水溶液于涂片處(染料以鋪滿涂片為度),然后將涂片放在銅板上,用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽時開始計算時間,約維持15-20mm。加熱過程中要隨時添加染色液,切勿讓標(biāo)本干涸(加熱時溫度不能太高)。 ②水洗:待破片冷卻后,用水輕輕地沖洗,直至流出的水中無染色液為止。 ③復(fù)染:用番紅液染色5m。 ④水洗、晾干或吸干。 ⑤鏡檢:先低倍,再高倍,最后在油鏡下觀察。 結(jié)果:芽胞呈綠色,菌體為紅色。

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